Academic column
Hunan haiyuan key recommendation: blood glucose and lipid analyzer

在一個月黑風高,凌晨兩點的夜晚,忙得不可開交的你,正準備審核完最后一個生化報告去休息室打個盹。然而,當你看到高大上的生化儀傳過來的結果時,砸儀器的心都有了。什么鬼?負值!于是,你不得不打起精神,重做一次。運氣好的話,半個小時能把報告發出去,運氣不好的話,嘿嘿嘿…… 那么,這個負值到底是怎么來的呢?


下面,我來試著解釋下生化項目負值的結果是怎么來的,為什么會出現負值。



上圖是兩點終點法的濃度計算公式,其中定標液1一般是0濃度,斜率和截距儀器默認一般是1和0(參數設置界面有可能做過更改,不是1和0)。那么負值就自然就來自于前半部分的K(Ax-Ab)。


1.Ab:即S1 Abs,就是我們通常說的試劑空白,不管是常規標本,定標還是質控測試的結果都會減去試劑空白。

2.Ax:也就是參數界面設置的兩點間吸光度的差值,具體計算方式如下圖(注意并不是簡單的將兩點的吸光度相減,并且考慮了加入R2之后的稀釋效應):

3.K:我們一般說的K值或K因數,定標之后得到或者手動輸入的,計算公式如下圖:

其中A2的計算方式與上面提到的Ax相同,S1 Abs即試劑空白。

以上三者都可能是負數,都與吸光度有關,所以凡是會造成吸光度不正常變化的因數都有可能造成負值的結果。


以下是一些影響結果的主要原因:


1.燈泡老化或質量問題:日立7180是要求吸光度>19000或750小時需要更換。


2.反應杯臟或者損壞:日立7180是要求與1號反應杯的吸光度差值<±800。


3.清洗針堵塞或者漏氣:反應液無法抽走或者無法添加清洗液進行清洗;也有的可能會在測試中滴水,反應液被稀釋,造成吸光度突然下降,可能出現負值。


4.攪拌棒清洗不干凈:攪拌棒有一層特氟龍涂層,如果被刮壞,不易洗干凈,易造成交叉污染。


5.樣品針堵塞:樣品沒有被加入到反應杯,沒有發生反應,反應曲線是一條直線,吸光度沒有變化,差值為負,出現負值。


6.試劑R1/R2添加錯誤:很多實驗室應該都是習慣于在試劑快用完了時,往試劑瓶里面添加試劑的做法,日立加樣順序是:樣本S+試劑R1+試劑R2,因為主要反應物在R2,如果放反了,樣本S和試劑R2直接就開始反應,吸光度上升,等試劑R1加入后吸光度下降,吸光度差值為負,結果出現負值。


7.嚴重脂血或黃疸標本:加入樣品S+R1時吸光度就很高,加入R2之后反應的吸光度可能還沒有S+R1高,吸光度差值為負,結果出現負值。


8.長時間未定標或未做試劑空白:試劑使用時間太長被污染或變質,試劑空白吸光度升高很多,等到你下次更換一瓶新試劑的時候,未定標或未做試劑空白,使用的還是被污染之后的定標和試劑空白結果,可能出現負值(見過超過一年沒有定標,沒有做試劑空白的)。


9.底物耗盡:通俗的講就是,濃度太高,試劑里面的反應物不夠用了,造成吸光度異常下降或上升。一般酶類項目會出現這樣的情況,可采取稀釋重做。


如果你說上面又是公式又是反應曲線的,太復雜了,我都不懂咋辦?那么你可以考慮試試采取以下方式處理:


1.查看標本是否脂血,如果是嚴重脂血標本試試高速離心后再檢測或讓患者清淡飲食幾天后再抽血檢測。


2.檢查試劑瓶R1/R2有沒有放反。


3.考慮試劑R1/R2添加錯誤,實際操作中這種情況可能性較大,可將R1/R2整瓶更換之后重新測試看看(反應曲線會有所表現,如果不會看的話直接換掉試試,注意是連瓶子一起換掉?。?。


4.如果是酶類項目或者速率法的項目出現負值或異常偏低的情況,考慮底物耗盡,可稀釋重測(反應曲線也可以看得出來)。


5.試劑連帶瓶子一起換掉,重新定標、做試劑空白,做質控再測標本(一般來講,可解決相當大的一部分結果問題,也比較容易操作)。


6.特別說下總膽紅素和直接膽紅素,這兩個可能是負值出現頻率較高的項目,因為他們反應的吸光度變化比較小,一般也就幾百的吸光度變化。


除了要注意樣本、定標品、質控品的避光以及試劑空白之外,建議定標的時候增加一個0濃度,也就是采用兩點定標,一般采用的是單點定標,默認0濃度的時候吸光度為0通過原點,但有時候其實不是的,對膽紅素這種反應度比較低的項目還是有影響的。


奧林巴斯的原裝膽紅素試劑,結果應該會比較好一些,專門設置了通道測定樣本的吸光度,反應的吸光度會減掉樣本的吸光度再進行計算。


7.拿起你手中的電話,騷擾負責你們儀器或試劑的廠家工程師,哈哈……


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